技术文献

科普:超微量分光光度计功能、特点、用途
阅读次数:102 发布时间:2023/6/6 9:36:54
分享到:
科普:超微量分光光度计功能、特点、用途  了解更多医疗产品信息请咨询:http://www.jmmedical.cn/product/
 
超微量分光光度计常见的用途
 
分光光度计是一类很重要的分析仪器 ,无论在物理学、化学、生物学、医学、材料学、环境科学等科学研究域 ,还是在化工、医药、环境检测、冶金等现代生产与管理部门 ,紫外可见分光光度计督有广泛而重要的应用。分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器,常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
 
超微量分光光度计已成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
 
核酸的定量
 
核酸的定量是超微量分光光度计使用频率功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。如:1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。测试,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积,尔后测试空白液和样品液。然而,实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者头痛的问题。灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大。
 
事实上,分光光度计的设计原理和工作原理,允许吸光值在一定范围内变化,即仪器有一定的准确度。如德国伯赫Colibri超微量分光光度计的准确度≤1.0%(1A)。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动,都是正常的。另外,还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值,离子浓度等:在测试时,离子浓度太高,也会导致读数漂移,因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液,如TE,可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素:由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒,尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了程度减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值在0.1-1.5A。在此范围内,颗粒的干扰相对较小,结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低,或者过高(超过光度计的测试范围)。是操作因素,如混合要充分,否则吸光值太低,甚至出现负值;混合液不能存在气泡,空白液无悬浮物,否则读数漂移剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否则浓度差异太大;换算系数和样品浓度单位选择一致;不能采用窗口磨损的比色杯;样品的体积必须达到比色杯要求的小体积等多个操作事项。
 
除了核酸浓度,分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品,A320一般是0。
 
蛋白质直接定量
 
这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。选择Warburg 公式,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质,一般要消除320nm 的“背景”信息,设定此功能“开”。与测试核酸类似,要求A280的吸光值至少大于0.1A,线性范围在1.0-1.5 之间。实验中选择Warburg 公式显示样品浓度时,发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上,只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%,表明结果非常稳定。漂移的原因是因为Warburg 公式吸光值换算成浓度,乘以一定的系数,只要吸光值有少许改变,浓度就会被放大,从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操作简单;但是容易受到平行物质的干扰,如DNA的干扰;另外敏感度低,要求蛋白的浓度较高。
 
比色法蛋白质定量
 
蛋白质通常是多种蛋白质的化合物,比色法测定的基础是蛋白质构成成分:氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度。
 
比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry 等几种方法。
 
Lowry 法:以早期的Biuret 反应为基础,并有所改进。蛋白质与Cu2 反应,产生蓝色的反应物。但是与Biuret 相比,Lowry 法敏感性更高。缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂;反应需要的时间较长;容易受到非蛋白物质的影响;含EDTA,Triton x-100,ammonia sulfate 等物质的蛋白不适合此种方法。
 
BCA(Bicinchoninine acid assay)法:这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2 反应产生Cu ,后者与BCA形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在562nm波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系强,反应后形成的化合物非常稳定。相对于Lowry法,操作简单,敏感度高。但是与Lowry法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。
 
Bradford 法:这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应,产生的有色化合物吸收峰595nm。其特点是,敏感度好,是Lowry 和BCA 两种测试方法的2 倍;操作更简单,速度更快;只需要一种反应试剂;化合物可以稳定1小时,方便结果;而且与一系列干扰Lowry,BCA 反应的还原剂(如DTT,巯基乙醇)相容。但是对于去污剂依然是敏感的。主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大,无可比性。
 
某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致,感到迷惑,究竟该相信哪种方法?由于各种方法反应的基团以及显色基团不一,所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性。例如:Keller等测试人奶中的蛋白,结果Lowry,BCA 测出的浓度明显高于Bradford,差异显著。即使是测定同一样品,同一种比色法选择的标准样品不一致,测试后的浓度也不一致。如用Lowry测试细胞匀浆中的蛋白质,以BSA作标准品,浓度1.34mg/ml,以a球蛋白作标准品,浓度2.64mg/ml。因此,在选择比色法之,是参照要测试的样本的化学构成,寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。另外,比色法定量蛋白质,经常出现的问题是样品的吸光值太低,导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大。关键问题是,反应后1011分光光度计的重要配件—— 比色杯的颜色是有一定的半衰期,所以每种比色法都列出了反应测试时间,所有的样品(包括标准样品),都必须在此时间内测试。时间过长,得到的吸光值变小,换算的浓度值降低。除此,反应温度、溶液PH值等都是影响实验的重要原因。此外,非常重要的是,是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材质的比色杯,因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色,导致样品吸光值不准确。
 
OD 600
 
实验室确定细菌生长密度,多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验,需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。以未加菌液的培养液作为空白液,之后定量培养后的含菌培养液。为了正确操作,必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数,做出校正曲线。实验中偶尔会出现菌液的OD值出现负值,原因是采用了显色的培养基,即细菌培养一段时间后,与培养基反应,发生变色反应。另外,需注意的是,测试的样品不能离心,保持细菌悬浮状态。
 
超微量分光光度计的主要结构
 
各种型号的分光光度计基本结构都相同,由如下五种部分组成:
 
1)光源(钨灯、卤钨灯,氢弧灯,氘灯、氙灯或激光光源);
 
2)单色器(滤光片、棱镜、光栅、全息栅);
 
3)样品吸收池;
 
4)检测系统(光电池、光电管、光电倍增管);
 
5)信号指示系统(检流计、微安表、数字电压表、示波器、微处理机显像管)。
 
光源-单色器-样品吸收池-检测系统-信号指示系统。
 
上海聚慕医疗器械有限公司,是家业经营销售医疗设备的公司。公司代理并经营国内外品牌医疗设备,主营医用体检、诊断、急救、化验、超声放射、医学分析、生命科学、康复治疗、手术室、急救室、诊疗室等医疗设备。电话——18901912755 公司凭借其医疗产品销售实力,以良好的信誉,诚信的经营,赢得广大用户及合作伙伴的支持和信赖。 上海聚慕医疗器械有限公司的飞速发展源于精心选择的产品线,客户的需求并给客户带来良好的利益。我们是许多国外生产厂家的授权代理商、总代理、代理和经销众多医用体检、诊断、急救、化验、超声放射、医学分析、生命科学、康复治疗、手术室、急救室、诊疗室等医疗设备。我们从未满足于已有的产品线,在任何时候,我们总是不断地在寻找和开拓新的产品和域。 上海聚慕医疗器械有限公司向以提高客户满意度为目标。为达到和超过客户和生产厂家提出的标准和要求 ,我们从未间断过对职业道德和业务水平的培训。我们的技术人员、业务人员和管理人员每周七天、每天24小时全天候地提供高质量和业化的售后服务和技术支持。我们还包括当天发货、免费送货等。 公司的服务宗旨是:客户至上,品质可靠,诚信为本! 公司的经营目标是:以诚信为经营之根本,为广大客户提供更多医疗设备,促进医疗事业的发展尽份力量。
 
标签:超微量分光光度计,超微量分光光度计特点,超微量分光光度计采购
(文章来源于互联网)

原创作者:上海聚慕医疗器械有限公司

产品搜索

请输入要搜索的关键词

联系我们
  • 公司名称:上海聚慕医疗器械有限公司
  • 公司地址:建韵路500号天纳商汇4座1715
  • 公司电话:400-901-5099
  • 公司传真:
  • 联系人:蒲经理
  • 手机:18221374310
  • 网址:www.jmmedical.cn
产品分类
急救设备
无影灯
除颤器
AED
吸痰器
呼吸机
心肺复苏器
止血带系统
球囊反博泵
升温仪
呼吸气体分析仪
临时起搏器
起搏器
急救箱
电动吸引器
体检设备
全科诊断系统
扫描仪
骨密度仪
肺功能仪
血压计
黄疸仪
功能检测仪
测量仪
消毒设备
伽玛射线灭菌器
蒸汽灭菌器
实验设备
恒温箱
荧光检测仪
切片机
脱水机
检测设备
凝血分析仪
血红蛋白分析仪
血氧仪
血压检测仪
手术设备
升降温毯
血液加温仪
超声刀、超声刀头
手术台/床、检查床、产床
排痰机
手术显微镜
输尿管镜
病床
营养泵
止血仪
皮肤缝合器
腹腔穿刺器
储存设备
监测设备
麻醉设备
麻醉设备
麻醉监护仪
麻醉机
治疗设备
高频电刀
臭氧治疗仪
低频治疗仪
红光治疗仪
高频治疗
压力疗
超声乳化仪
脑循环治疗仪
刺激仪
脉冲起压治疗仪
妇产科设备
吸引器
妇科检查椅
培养箱
保暖台
保育箱
母婴监护仪
心率仪
胎心仪
分娩监护
妇产康复
康复理疗
冲击波碎石机
牵引仪
空气波压力治疗仪
超声波治疗仪
短波治疗仪
吞咽治疗仪
电刺激治疗仪
肌肉刺激理疗仪
干涉波治疗仪
微波治疗仪
障碍治疗仪
医用光学
3M耗材
生物阅读器
指示胶带
测试包
消毒液
指示剂
敷料
电ji
脑电图
治疗装置
手术器具、耗材
缝合线
慕丝线
倒刺线
活检枪
次性活检针
导针器
引流套管
强生刀头
伤口敷料
过滤器
止血纱
中心静脉导管
电ji
呼吸机管路
补片
介入穿刺
插管
吻合器
定位针
刺激器
刺激针
穿刺器
导管
留置针
活检针
穿刺针及耗材
注射针
心内科
胃动力
监护仪
心电图机
五官科
口腔
中医科
骨质治疗仪
导入治疗仪
定向透药
中频干扰
熏蒸机
针灸治疗仪
刮痧仪
护理科
模拟器
模拟人
新生儿
皮肤科
痤疮
皮肤测试仪
皮肤镜
光疗系统
红外线治疗仪
耳鼻喉科
听力筛查仪
可视喉镜
动力系统
耳声发射仪

上海聚慕医疗器械有限公司:
地址:建韵路500号天纳商汇4座1715 电话:400-901-5099 传真: 技术支持:阿仪网  (沪)-非经营性-2022-0060 总访问量:1006466

8:30-22:30
18901912755
400-901-5099

12

阿仪网推荐收藏该企业网站